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Metodología para el Cálculo del Porcentaje Tumoral
AstraZeneca
Grupo de expertos
Fco. Javier Freire Salinas
Laboratorio de Patología Molecular, Servicio de Anatomía Patológica del Hospital Universitario Marqués de Valdecilla.
Sofía del Carmen Martínez
Facultativo Especialista en Anatomía Patológica, Servicio de Anatomía Patológica del Hospital Universitario Marqués de Valdecilla.
Introducción
La llegada de los tratamientos personalizados a la oncología ha requerido un aumento exponencial en los test moleculares diagnósticos que se llevan a cabo en los laboratorios de patología. Es por esto, que los servicios de Anatomía Patológica se han convertido en un eslabón imprescindible en la medicina de precisión y de ellos depende la conservación y utilización con calidad y rigurosidad de las muestras tumorales. Junto a esta necesidad de tests, la creciente necesidad de cubrir grandes áreas genéticas ha generado la demanda del uso de tecnologías de análisis a gran escala como la secuenciación masiva paralela.
Aunque cada test utilizado en patología molecular tiene asociado parámetros concretos de sensibilidad, especificidad, requerimientos mínimos de celularidad y concentración de los ácidos nucleicos, todos tienen algo en común: la principal fuente de material genético es el tejido fijado en formol e incluido en parafina. Aunque el presente documento intenta presentar unas bases generales sobre el cálculo del porcentaje de celularidad tumoral, es de rigor recordar que la fase preanalítica es un proceso de vital importancia en la calidad de la “muestra molecular” obtenida1.
En relación con esta fase preanalítica, algunos aspectos han sido ampliamente analizados y debatidos, generándose multitud de guías (como las que se pueden encontrar en el proyecto SPIDIA*) son:
- el tiempo máximo de isquemia fría2
- el uso de formol tamponado2
- el tiempo de fijación formólica (diferente para muestra pequeñas y grandes)3
- la temperatura de fijación o
- el tipo de parafina utilizada4
Es importante conocer por qué ha de calcularse con precisión el porcentaje de celularidad tumoral a la hora de realizar un análisis molecular. Conocer con exactitud este parámetro nos permite aproximar la sensibilidad analítica de una técnica, es fácil entender que en ningún caso vamos a poder llegar a una sensibilidad de un 15% si no tenemos más del 10% de celularidad tumoral. Además, y sobre todo para tecnologías como la secuenciación masiva, saber la cantidad de células tumorales de la que partimos es imprescindible a la hora de calcular las alteraciones en el número de copias (CNV) ya que, en esta técnica, el cálculo de CNV se basa en la probabilidad de obtener un mayor o menor número de lecturas, al tener una amplificación o deleción con respecto a un control normal (figura 1).
Cálculo CNV: un ejemplo
Figura 1
Asumiendo que leemos una copia por cada alelo A) 100 células normales: 200 alelos, B) 100 células tumorales con CNV=3 300 alelos, C) si sólo tenemos 5% de celularidad tumoral y tenemos 300 alelos: CNV=22
Imágenes: El super villano del cuerpo humano. Mónica Lara Márquez. Saber Más: revista de divulgación, año 11, no. 62, marzo-abril
Es importante destacar que, tradicionalmente, en los servicios de Anatomía Patológica para la cuantificación de distintas técnicas (sobre todo las inmunohistoquímicas) se ha utilizado como parámetro un área tumoral marcada respecto al área total5. Sin embargo, para las técnicas moleculares esta aproximación no es válida. En el momento en el que requerimos utilizar ácidos nucleicos, es necesario saber con precisión con cuantos núcleos tumorales contamos con respecto del total de células del tejido (linfocitos, fibroblastos, células que forman parte de estructuras vasculares, etc.), ya que es sobre esa proporción sobre la que vamos a interrogar a la muestra.
Ejemplo de porcentaje de células tumorales
En la imagen 2 se puede visualizar un ejemplo claro de por qué el área tumoral no es un buen cuantificador cuando buscamos una extracción de ácidos nucleicos; en este ejemplo, estaríamos sobreestimando en más de un 40% el procentaje tumoral, con todos los errores analíticos posteriores que se desprendan de esta cuantificación.
Queda claro por tanto, que es necesario saber el número de células tumorales respecto al total de células, ya que son éstas las que pueden presentar las alteraciones buscadas mientras que el resto de células normales presentarían competencia con su ADN normal. Por el momento, la única manera es contarlas individualmente.
Se presentan a continuación, unas recomendaciones para facilitar este cálculo y para dilucidar la mejor muestra para los estudios moleculares.
- Ejemplos
- Resumen
- Conclusiones
- Casos
En bloques de tejido, si el tumor está predominantemente en una zona, es aconsejable seleccionar esa zona para realizar posteriormente macrodisección y calcular el porcentaje de células tumorales sobre esa zona.
En este caso de un bloque de tejido de un adenocarcinoma acinar prostático en una pieza de prostatectomía, seleccionamos la zona del cristal donde está localizado el tumor, evitando el parénquima prostático no tumoral, y calculamos en ella el porcentaje de células tumorales (en esta muestra observamos un 50% de núcleos de células tumorales en el área seleccionada).
En un bloque de tejido, si todo el bloque tiene representación de tumor, calcular el porcentaje de células tumorales en la totalidad de la laminilla.
En este caso de un bloque de tejido de un adenocarcinoma acinar prostático en una pieza de prostatectomía, no se podría seleccionar una zona con mayor representación de tumor, por lo que el cálculo se podría realizar en campos de toda la preparación (en esta muestra observamos un 70% de núcleos de células tumorales).
En biopsias pequeñas (broncoscopias, cilindros, BAG), si el tumor está predominantemente en una zona y se puede individualizar de manera sencilla para realizar macrodisección, seleccionar la zona y calcular el porcentaje de células tumorales sobre esa zona.
En este caso de un cilindro de próstata con un adenocarcinoma acinar, seleccionamos la zona del cristal donde está localizado predominantemente el tumor, evitando el parénquima prostático no tumoral, y calculamos en ella el porcentaje de células tumorales (en esta muestra observamos un 60% de núcleos de células tumorales en el área seleccionada).
En biopsias pequeñas (broncoscopias, cilindros, BAG), si no es posible realizar macrodisección, calcular el porcentaje de células tumorales sobre la totalidad de la muestra.
En este caso de una muestra obtenida por broncoscopia de un carcinoma de pulmón no microcítico, no se podría seleccionar una zona con mayor representación de tumor, por lo que el cálculo se realizaría en toda la preparación (en este caso, considerando el alto contenido en células inflamatorias de la muestra, observamos un 40% de núcleós de células tumorales).
En bloques celulares (citología), si el tumor está predominantemente en una zona y se puede individualizar de manera sencilla para realizar macrodisección, seleccionar la zona y calcular el porcentaje de células tumorales sobre esa zona.
En este caso de una PAAF ecoendoscópica de un adenocarcinoma de páncreas, seleccionamos la zona del cristal donde está localizado el tumor, evitando una zona hemática y con detritus ceulares y calculamos en ella el porcentaje de células tumorales (en este caso observamos un 70% de núcleos de células tumorales en el área seleccionada).
En bloques celulares (citología), si no es posible realizar macrodisección, calcular el porcentaje de células tumorales sobre la totalidad de la muestra.
En este caso de una PAAF transbronquial de un carcinoma de pulmón no microcítico, no se podría seleccionar una zona con mayor representación de tumor, por lo que el cálculo se realizaría en toda la preparación (en este caso observamos un 60% de núcleos de células tumorales, considerando el componente inflamatorio y estromal de la muestra).
ADN: ácido desoxirribonucleico.
1. Fujii S, Yoshino T, Yamazaki K, Muro K, Yamaguchi K, Nishina T, et al. Histopathological factors affecting the extraction of high quality genomic DNA from tissue sections for next-generation sequencing. Biomed Rep. 2019 Oct;11(4):171-180. doi: 10.3892/br.2019.1235. Epub 2019 Aug 21. PMID: 31565223
2. Cree IA, Deans Z, Ligtenberg MJ, Normanno N, Edsjö A, Rouleau E, et al; European Society of Pathology Task Force on Quality Assurance in Molecular Pathology; Royal College of Pathologists. Guidance for laboratories performing molecular pathology for cancer patients. J Clin Pathol. 2014 Nov;67(11):923-31. doi: 10.1136/jclinpath-2014-202404. Epub 2014 Jul 10. PMID: 25012948.
3. Comănescu M, Arsene D, Ardeleanu C, Bussolati G. The mandate for a proper preservation in histopathological tissues. Rom J Morphol Embryol. 2012;53(2):233-42. PMID: 22732791.
4. Bussolati G, Annaratone L, Maletta F. The pre-analytical phase in surgical pathology. Recent Results Cancer Res. 2015;199:1-13. doi: 10.1007/978-3-319-13957-9_1. PMID: 25636424. *http://www.spidia.eu
5. Furukawa Y, Kimijima I I, Abe R. Immunohistochemical Image Analysis of Estrogen and Progesterone Receptors in Breast Cancer. Breast Cancer. 1998 Oct 25;5(4):375-380. doi: 10.1007/BF02967434. PMID: 11091678.
ES-35002 Febrero 2025
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